Nicolas Hulscher, MPH1 – Vanessa Schmidt, PhD2 – Michael Mörz, MD3 – Claire Rogers, PA-C1 – Natalia von Ranke, PhD4 – Wei Zhang, PhD4 – John A. Catanzaro ND, PhD4 – Peter A. McCullough MD, MPH1
1 Fondation McCullough, États-Unis
2 L’Institut de diagnostic moléculaire (INMODIA GmbH), Allemagne
3 L’hôpital municipal de Dresde-Friedrichstadt, Allemagne
4 Neo7Bioscience, États-Unis
Abstrait
Contexte : La biodistribution et la persistance à long terme des composants des vaccins à ARN contre la COVID-19 restent insuffisamment caractérisées. Des données récentes suggèrent que l’expression prolongée de la protéine Spike, l’ARN résiduel et les fragments d’ADN plasmidique pourraient contribuer aux syndromes post-vaccinaux multisystémiques.
Présentation du cas : Nous rapportons le cas d’un homme de 55 ans ayant reçu trois doses du vaccin à ARNm Pfizer-BioNTech contre la COVID-19 et ayant développé par la suite un syndrome post-vaccinal COVID-19 (SPVCP) avec défaillance multiviscérale progressive, touchant les systèmes cardiopulmonaire, neurologique, musculosquelettique, gastro-intestinal, autonome, ORL, audiovestibulaire, immunitaire, ophtalmologique, dermatologique et psychiatrique. Les manifestations cliniques comprenaient : embolie pulmonaire ; myocardite confirmée par IRM à un stade tardif ; troubles neurocognitifs ; neuropathie des petites fibres ; dysfonctionnement du système nerveux autonome ; myalgies ; atteinte pancréatique et gastro-intestinale chronique ; aggravation des acouphènes avec surdité de perception ; dysphagie et dysphonie ; troubles ophtalmologiques ; inflammation dermatologique chronique ; et anxiété/dépression. Le cas a été évalué au moyen d’une enquête clinique longitudinale et multidomaine exceptionnellement vaste, comprenant des analyses moléculaires, immunologiques, génétiques, protéomiques, transcriptomiques et tissulaires, entreprise pour caractériser les mécanismes de la maladie et exclure d’autres étiologies.
Évaluation diagnostique : Après plus de 40 passages aux urgences et plus de 200 consultations spécialisées en ambulatoire, le patient a subi plus de 100 examens de laboratoire non systématiques et plus de 100 examens d’imagerie/fonctionnels. Cette évaluation a systématiquement exclu les mécanismes étiologiques sous-jacents dans les domaines infectieux, auto-immuns, rhumatologiques, endocriniens, génétiques, hématologiques, malins, toxiques/médicamenteux, cardiovasculaires/vasculaires, métaboliques et neurologiques primaires. Les tests sont restés en grande partie non diagnostiques. Une infection asymptomatique non documentée/non diagnostiquée, se manifestant par un COVID long, a été suspectée après le diagnostic de myocardite, et une sérologie a été réalisée ; des résultats inattendus ont conduit à des tests immunologiques et tissulaires plus poussés pour la protéine Spike et les composants dérivés du vaccin. Les anticorps anti-nucléocapside du SARS-CoV-2 étaient négatifs à cinq reprises, entre 809 et 1 433 jours après la vaccination, ce qui a été confirmé par trois laboratoires indépendants. Le patient reste négatif à la nucléocapside avec des niveaux d’anticorps Spike constamment élevés (4 553 U/mL) 1 433 jours après la dernière vaccination.
Prélèvement et méthodes d’analyse : Des échantillons de sang et de tissu cutané ont été prélevés à différents moments entre 852 et 1 364 jours après la dernière vaccination par ARNm contre la COVID-19 de Pfizer-BioNTech. Les compartiments biologiques analysés comprenaient le plasma, les exosomes circulants, les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) et le tissu cutané. Les échantillons ont été analysés par plusieurs laboratoires indépendants à l’aide de diverses méthodes analytiques, notamment ELISA, l’immunohistochimie automatisée, la RT-PCR, la PCR standard avec confirmation par séquençage Sanger, le séquençage du génome entier, le profilage transcriptomique et la spectrométrie de masse quantitative.
Résultats moléculaires circulants : 852 jours après la vaccination, des tests immunologiques sanguins ont mis en évidence la protéine S1 du SARS-CoV-2 dans les sous-populations de monocytes classiques et non classiques, associée à des anomalies des cytokines et des marqueurs immunitaires. 1 173 jours après la vaccination, un test ELISA haute sensibilité a détecté la protéine Spike libre de Wuhan dans le plasma (129,0 ± 4,1 fg/mL) et dans les exosomes circulants (11,6 ± 0,1 fg/mL). 1 284 jours après la vaccination, une RT-PCR a identifié l’ARNm de la protéine Spike dérivée du vaccin dans les exosomes circulants, tandis que l’ARN des PBMC est resté négatif après extraction à la DNase et PCR spécifique d’amplicons ciblant trois régions ORF de la protéine Spike (S1–S3). Le profilage sérologique à 1 173 et 1 284 jours après la vaccination a démontré des concentrations d’IgG4 spécifiques à la protéine Spike constamment élevées (354,4 ± 22,4 ng/mL et 320,2 ± 4,4 ng/mL, respectivement), compatibles avec une stimulation antigénique continue et une réponse biaisée vers la tolérance immunitaire.
Résultats moléculaires et histopathologiques au niveau tissulaire : Des biopsies cutanées sérielles réalisées 1 160, 1 249 et 1 364 jours après la vaccination, toutes prélevées sur la peau du tronc dans des zones de maladie de Grover cliniquement active, étaient négatives pour la nucléocapside et ont démontré un dépôt persistant de protéine Spike dans les cellules endothéliales et les macrophages par immunohistochimie automatisée avec corrélation histopathologique. La protéine Spike a également été retrouvée dans les fibres nerveuses à 1 364 jours. La biopsie cutanée à 1 364 jours contenait de multiples éléments d’ADN plasmidique, notamment les séquences des gènes Spike (S1–S3), ori1/ori2 et l’amplificateur SV40, confirmant la rétention durable de l’ADN dérivé du vaccin dans les tissus somatiques par amplification PCR avec électrophorèse sur gel d’agarose et séquençage Sanger.
Analyse multi-omique : L’analyse des variants structuraux par séquençage du génome entier, réalisée 1 277 jours après la vaccination, a révélé une instabilité génomique généralisée, avec d’importantes duplications et délétions affectant les gènes EGFR, MYC, ERBB2 et ETV6/RUNX1. La comparaison ARN-ADN a mis en évidence des variants spécifiques à l’ARN dans les voies ribosomiques, NMD, des petits ARN, épigénétiques et TP53. Le profilage transcriptomique du sang total a souligné un stress oxydatif, une activation vasculaire et une fragilité nucléaire. L’analyse protéomique urinaire par spectrométrie de masse quantitative a confirmé une inflammation systémique avec hyperactivation du complément (CFH), déséquilibre redox (PRDX1) et réponses anticorps soutenues, associées aux allèles à risque HLA-B07:02 et DRB1*11:04.
Conclusion : Ce cas documente la persistance in vivo la plus longue jamais rapportée d’ARNm, de fragments d’ADN plasmidique et de protéine Spike dérivés d’un vaccin après une vaccination par ARNm. Cette persistance a été détectée de manière reproductible dans plusieurs laboratoires indépendants, différents compartiments biologiques et à l’aide de systèmes de détection moléculaire complémentaires, et ce, pendant plus de 3,5 ans après la dernière dose. La protéine Spike, les séquences d’ARNm de la protéine Spike et les éléments du squelette plasmidique ont été identifiés à la fois dans les cellules immunitaires et les tissus somatiques, en l’absence continue de protéine de nucléocapside du SARS-CoV-2 et d’anticorps, excluant ainsi une infection antérieure comme source de contamination. La convergence de ces observations, confirmée par des prélèvements sanguins et tissulaires longitudinaux, apporte la preuve directe que le matériel génétique dérivé d’un vaccin à ARNm et ses produits protéiques traduits peuvent persister in vivo pendant des années après l’administration. Parallèlement, des analyses multi-omiques ont révélé une instabilité génomique et une dérégulation transcriptomique persistantes plus de 3,5 ans après la vaccination, suggérant que la persistance du matériel vaccinal pourrait être associée à des altérations à long terme des voies génomiques et moléculaires de l’hôte. Ces données remettent en question les hypothèses courantes concernant la dégradation rapide et l’activité biologique de courte durée des composants des vaccins à ARNm et soulignent la nécessité d’études longitudinales contrôlées pour déterminer la prévalence, les mécanismes et les conséquences cliniques de la persistance de matériel dérivé du vaccin.